有機(jī)相：(如乙腈、甲醇):使用 HPLC級溶劑，經(jīng) 0.22um有機(jī)濾膜過濾.   

水相：(如緩沖鹽、酸/堿溶液)  

用超純水配制：(電阻率>18.2 MΩ.cm)    

濾前超聲脫氣 15 分鐘，避免產(chǎn)生氣泡,再經(jīng) 0.22 um 水相濾膜過濾

注意事項: 含鹽流動相需現(xiàn)配現(xiàn)用，防止微生物滋生或鹽析出。標(biāo)注流動相成分、pH、配制日期。 

替換流動相瓶：關(guān)閉泵(防止吸入氣泡)取下舊流動相瓶，用新流動相潤洗瓶口和管路接口3次,安放新流動相瓶，確保管路浸入液面下(避免吸入氣泡)

開機(jī)與系統(tǒng)準(zhǔn)備

開機(jī)順序:    打開電腦，啟動 Agilent OpenLab CDs 軟件。    

開啟儀器電源:泵→自動進(jìn)樣器→柱溫箱→檢測器(DAD/VWD)。  

系統(tǒng)初始化/自檢:等待各模塊狀態(tài)顯示“就緒"    

灌注流動相(Purge)：設(shè)置泵為“灌注模式”(打開 Purge 閥，流速5 mL/min).依次灌注 A/B/C/D 四通道，每通道灌注3分鐘，排出管路氣泡。

關(guān)鍵點(diǎn):灌注后，流速為0，關(guān)閉Purge閥，再恢復(fù)流速至正常值(如 1.0 mL/min)    

色譜柱安裝:  確認(rèn)色譜柱流向(箭頭方向與流動相流向一致)連接色譜柱，手動擰緊(避免過緊導(dǎo)致漏液或損壞接口)設(shè)置流動相比例(如初始條件:95%水相+5%乙腈)流速逐步升高至工作流速(如 0.5→1.0 mL/min，每次增加0.2mL/min，間隔5分鐘)    

平衡時間:新柱至少 30分鐘(或至基線平穩(wěn));換流動相后平衡 15 分鐘。

注意事項:含鹽流動相替換為高有機(jī)相時，!需過渡沖洗(如先用10%甲醇過渡)監(jiān)測柱壓波動(正常波動范圍±10%)

壓力異常處理:檢查是否漏液或流動相未充分脫氣管路內(nèi)是有明顯氣泡，管路溶劑濾頭是否堵塞，流動相是否足夠，溶劑濾頭再液面以下，安捷倫的過濾小白頭是否定期更換，以上處理方法未解決異常需要考慮維護(hù)儀器單向閥、更換柱塞桿密封圈。

系統(tǒng)沖洗:若流動相含緩沖鹽，實驗結(jié)束后需以高水相(如 90%水 +10%甲醇)沖洗 30分鐘，再過渡至高有機(jī)相保存。

空白進(jìn)樣測試: 進(jìn)樣 20μL純?nèi)軇?如流動相)，運(yùn)行分析方法，確認(rèn)無雜峰、基線平穩(wěn)。

基線異常處理:若出現(xiàn)鬼峰:檢查流動相污染或管路殘留，重新沖洗系統(tǒng)。

基線漂移:檢查柱溫穩(wěn)定性或流動相未充分脫氣，流通池污染流動相有長菌或結(jié)晶物質(zhì)。

樣品分析與數(shù)據(jù)采集

樣品準(zhǔn)備:樣品經(jīng) 0.22 μm 濾膜過濾，裝入進(jìn)樣瓶(避免過滿，液面距瓶囗≥5 mm)。樣品瓶可分為預(yù)開口和不預(yù)開口樣品瓶，可根據(jù)樣品特性和儀器特性進(jìn)行選擇。

方法設(shè)置:創(chuàng)建新方法文件

設(shè)置參數(shù)泵:流動相比例、流速(如1.0 mL/min)

柱溫箱:溫度(如 30°C)

檢測器:波長(如 280 nm)、采樣速率(如 2 Hz)

自動進(jìn)樣器:進(jìn)樣體積(如 20 μL)、洗針次數(shù)(如 3次). 

運(yùn)行序列:在序列表中添加樣品信息(名稱、位置、方法文件)點(diǎn)擊“運(yùn)行序列”，實時監(jiān)測色譜圖與壓力曲線。運(yùn)行序列前務(wù)必要檢查樣品位置與序列表一致，方法設(shè)置是否一致，流動相管路有沒有放置錯誤，壓力和基線是否正常，上述檢查無異常后開始運(yùn)行序列。

結(jié)束操作與關(guān)機(jī)

系統(tǒng)沖洗:實驗結(jié)束后，以高比例有機(jī)相(如 90%乙腈)沖洗色譜柱30 分鐘，去除殘留。

含鹽流動相:先用水相沖洗 30 分鐘，再過渡到有機(jī)相。

色譜柱保存:反相柱:保存在 90%以上甲醇或乙腈中，拆卸后兩端密封，正相柱:保存在正已烷中(需根據(jù)柱類型調(diào)整) 

關(guān)機(jī)順序:軟件中關(guān)閉流速，停止泵。關(guān)閉檢測器→柱溫箱一自動進(jìn)樣器一泵。    退出軟件，關(guān)閉電腦及儀器電源，

日常維護(hù)清單

每日:檢查流動相余量(特別是需要過夜運(yùn)行)、清潔自動進(jìn)樣器外表面，檢查廢液瓶中廢液量及時清理廢液。

每周:更換在線過濾器濾芯，沖洗自動進(jìn)樣針。每月:執(zhí)行泵密封圈潤滑，檢測檢測器燈能量，建議結(jié)合儀器說明書與實驗室 SOP 靈活調(diào)整!